考马斯亮蓝染色
1921年, Folin首创了测定可溶性蛋白质含量的方法Folin-酚试剂法。Folin-酚试剂法是基于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基 (酚基) 与酚试剂 (磷钨酸#磷钼酸) 可发生蓝色反应的原理；而蓝色化合物的颜色深浅与蛋白质浓度呈正比。1951年, Lowry对Folin法进行了改进, 他发现在碱性溶液中, 蛋白质分子中的肽键可与碱性铜试剂中的Cu2+螯合, 形成蛋白质-铜复合物, 该复合物能够与Folin酚试剂反应产生蓝色化合物，这一改进大大提高了测定的灵敏度, 改进后的方法被称为“Lowry法”。不过Lowry法仍存在测定范围窄、使用试剂多、干扰物质多、耗费时间长、反应时间难以控制等缺点。1976年美国科学家Bradford用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的方法来定量测定蛋白质含量。考马斯亮蓝法是目前实验室中最常见、灵敏度最高的一种测定蛋白质含量的方法。它将比色法和染料结合法相结合, 与其他传统方法相比具有许多突出的优点, 被广泛应用于各类生物材料的可溶性蛋白含量测定, 是生物化学、植物生理学、分子生物学、食品科学等实验课程中的经典实验项目之一。
考马斯亮蓝是一种阴离子染料， 常用考马斯亮蓝G250和R250。考马斯亮蓝 G250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质通过疏水结合后变为蓝色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。考马斯亮蓝G250染色可以同时固定和染色，因此能立即观察显色结果，可用来确定电泳时间，观察初步结果。考马斯亮蓝R250染色灵敏度比G250高得多，但对酸溶蛋白、醇溶蛋白不合适，因为在染色过程中，蛋白质会溶解在染色液或脱色液中。可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE蛋白电泳的快速染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
1、试剂配制
（1）考马斯亮蓝染色液R250配方（100ml）考马斯亮蓝R250 | 0.25g |
甲醇 | 45ml |
乙酸CH₃COOH | 10ml |
ddH2O | 45ml |
（2）考马斯亮蓝脱色液配方（1000ml）
甲醇 | 250ml |
乙酸CH₃COOH | 80ml |
ddH20定容至1000ml | |
2、具体操作步骤
（1）电泳结束后，切取含有Maker蛋白和蛋白样品的凝胶块放入适量考马斯亮蓝染色液中，保证液体可以完全浸没凝胶；（2）置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢晃动，室温染色1h及以上（或置于微波炉等加热装备进行间隔加热染色，每次3~5min，加热3~4次）；
（3）回收染色液（染色液可重复利用2~3次）；
（4）加入适量考马斯亮蓝脱色液，确保脱色液完全覆盖凝胶；
（5）置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4~24h。期间更换脱色液2~4次，直至蓝色背景基本脱去。通常蛋白条带在脱色1~2小时后就可出现（也可以通过微波炉等加热装置间接加热进行脱色，每次3~5min，加热次数根据脱色效果而定）
（6）完成脱色后，用ddH2O浸泡，进行检测和观察。
QuickBlue快速染胶液
1、产品详情
Biodragon的QuickBlue快速染胶液是绿色环保型凝胶染液，可对凝胶中的蛋白条带进行染色，可替代常规的考马斯亮蓝染液。与常规考马斯亮蓝染色相比：
（1）无需凝胶固定和脱色，省时，简单；
（2）不含有甲醇、乙酸等对身体有害，刺鼻的物质；
（3）无需在通风橱中操作；
（4）可以完全代替常规的考马斯亮蓝染液。
2、使用方法
（1）取出电泳槽中的凝胶，放到染胶容器中；（2）加染液至覆盖凝胶，在摇床上染色；
（3）将染出条带的凝胶放水中保存即可。
注意：
（1）对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验，一般染色10-20分钟（可以将100ng含量以上的蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；
（2）对于灵敏度要求极高的染胶实验，一般可采用染色1-2小时（可以将10ng含量蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；
（3）一般染色2小时后，蛋白条带基本不会再加深，而背景会继续加深，所以一般建议染色不要超过2小时；
（4）如果对凝胶背景要求很高，可将蛋白胶在水中，然后放在摇床上2小时，期间换4次水，可快速脱去背景颜色，也可以在水中浸泡过夜后，可使凝胶背景变成完全透明状态。
3、产品特性
（1）外观：蓝色液体（2）成份：为G-250考马斯亮蓝颜料，含有少量乙醇，磷酸
（3）保存：室温避光保存
（4）稳定性：室温可保存24个月
4、参考数据
图1~5为不同浓度BSA凝胶电泳的QuickBlue快速染胶液染色效果图图1 ：染色20min 效果图
图2 ：染色1h效果图
图3：染色2h效果图
图4：凝胶在QuickBlue快速染胶液中浸泡过夜效果图
图5 ：为图4中的凝胶在水中洗2h 后的效果图
图6：客户反馈实验图
图7：QuickBlue快速染胶液
货号：BF06152
规格：500ml
价格：540 RMB
公司简介
Biodragon是一家由留学归国人员创办的生命科学领域技术研发型企业，专业从事新型生化试剂的研发和销售。公司理念是通过自主创新的品牌产品改变传统实验模式，使生命科学研究变得更轻松、更高效。公司成立八年多来推出了上万种自主品牌产品，其中包括QuickAntibody™免疫佐剂、QuickShuttle™转染试剂、QuickFreezing™细胞冻存液、QuickVerification™胶体金检测卡、Hybridoma Feeder添加因子和Pan-HPV™ HPV L1抗体等多种独特的自主知识产权产品。秉承“专业、创新”的理念，公司将继续在擅长专业领域做强做大，为客户提供更多的创新产品和服务，力争成为国际知名的品牌生化试剂公司。
公司主要产品有抗体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗体、近300种病理级抗体、近3000余种病毒蛋白及病毒抗体，另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
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