在培养细胞时，我们通常是没有一个完美的参照物去对比每种细胞形态是否正常，只能根据细胞的三种基本形态去辅助判断。但由于培养细胞环境各不相同，很多老师同学也无法判断出自己的细胞形态是否正常，也会影响接下来的实验。
今天我们小编将与大家一起对这个问题进行探讨~
细胞的基本形态
大多数培养的哺乳动物细胞根据其形态可以分为三大类：
△成纤维细胞（成纤维细胞样）
细胞是双极或多极的，狭长型，贴壁细胞。
△上皮细胞
呈多角形，尺寸更为规则，贴附在基质上呈散斑片状生长。
△淋巴细胞
呈球形，通常悬浮生长，不贴附在基质表面。
△HEF胎儿包皮成纤维细胞
△huh7人肝癌细胞
△病前
△病后
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（永生）Raw264.7
这个时候大家肯定很想知道是什么原因导致的，一般形态异常首先考虑的就是污染原因。
污染又大致分为以下几点：细菌污染、真菌污染、支原体污染、黑胶虫污染。那么这几种污染是如何区分的呢？
特征：
- * 在显微镜下或成黑色细沙状，或背景有大量黑点
- * 可能造成细胞增殖缓慢或形态上的改变（多角、多核等），细胞质中产生空泡、细胞不附着
如果确认是细菌污染，细胞娇贵不舍得丢掉的不要担心，我们已经为您准备好了相应对策。
细菌的克星-抗生素
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货号 |
抗生素 |
作用对象 |
使用比例 |
储存条件 |
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03-049-1B |
卡那霉素溶液（10mg/ml） |
细菌（如G+、G-、支原体） |
稀释:1:100 |
-20ºC |
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03-035-1B |
硫酸庆大霉素溶液（50 mg/ml） |
细菌（如G+、G-、支原体） |
稀释: 1:1000 |
AMB室温 |
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03-031-1B |
青链双抗 |
细菌（如G+、G-） |
稀释: 1:100 |
-20ºC |
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03-031-5B |
青链双抗，10浓缩液 |
细菌（如G+、G-） |
稀释: 1:1000 |
-20ºC |
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03-032-1B |
青链霉素，制霉菌素三抗 |
细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌） |
稀释: 1:100 |
-20ºC |
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03-033-1B |
青链霉素，两性霉素B三抗 |
细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌） |
稀释: 1:100 |
-20ºC |
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03-034-1B |
青链霉素，新霉素三抗 |
细菌（如G+、G-） |
稀释: 1:100 |
-20ºC |
真菌污染时会有类似棉花絮状的漂浮物，念珠菌会呈卵圆状，在细胞周边生长。
早期并不会使得培养基变黄变浑浊，但是在显微镜下可观察到菌丝体。真菌形成的菌丝呈丝状，管状，树枝状，串珠状。
真菌污染至少要三天后才能长出异常瑰丽的花纹图案。
酵母菌等，当其行出芽生殖时可通过一大一小的连体结构识别。
真菌污染整体特征是：
- * 细胞被污染后，仍可生长，长时间细胞的活力状态会变差
- * 梅雨季节时的污染率会提高
- * 呈卵圆状，在细胞周边生长，成团生长为真菌群
希望您的细胞不要也这样“好看”，不然只能留作欣赏用途了，或者可以尝试使用如下方法救治。
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货号 |
抗生素 |
作用对象 |
使用比例 |
储存条件 |
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03-029-1B |
两性霉素B（2500 ug/ml） |
真菌（如：酵母菌、霉菌） |
稀释:1:1000 ~ 1: 10,000 |
-20ºC |
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03-030-1C |
制霉菌素（10,000 units/ml） |
真菌（如：酵母菌、霉菌） |
稀释:1:100 to 1:1000 |
-20ºC |
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03-032-1B |
青链霉素，制霉菌素三抗 |
细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌） |
稀释: 1:100 |
-20ºC |
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03-033-1B |
青链霉素，两性霉素B三抗 |
细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌） |
稀释: 1:100 |
-20ºC |
支原体广泛存在于人和动物体内，消毒不完全的器具也易带入支原体。污染时细胞培养基可能依然澄清或者呈微黄色，抽提核酸与蛋白时可有高达30~50%为支原体来源，造成结果偏差。那么支原体污染都有哪些明显特征呢？
- * 革兰氏染色为阴性，0.15-0.3 μm，光学显微镜难以辨识
- * 明显影响到细胞形态、增殖、基因表达与蛋白合成及代谢反应
也可使用支原体检测试剂盒进行检测：
该试剂盒可检测的14种支原体是：M.fermentans（发酵支原体）, M.hyorhinis（猪鼻支原体）, M.arginini（精氨酸支原体）, M.Orale（口腔支原体）, M.Salivarium（唾液支原体）, M.hominis（人型支原体）, M.pulmonis（肺支原体）, M.arthritidis（关节炎支原体）, M.bovis（牛支原体）, M.pneumoniae（肺炎支原体）, M.pirum（梨支原体）and M.capricolum（山羊支原体）, as well as Acholeplasma（无胆甾原体）and Spiroplasmaspecies（螺原体）。
△电泳图谱电泳结果（图片来源：终端用户仅供参考）
支原体检测试剂盒的特异性:
EZ-PCR支原体检测试剂盒（货号：20-700-20）。
引物与美国国家生物技术中心（NCBI）数据库进行比对，并检测16SrRNA靶区同源性。96种支原体具有相关序列同源性。
BIOMYC-1 货号：03-036-1B 主要成分：太妙菌素
BIOMYC-2 货号：03-037-1B 主要成分：Minocycline
BIOMYC-3 货号：03-038-1B 主要成分：环丙沙星
方案一
BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）的使用方法：
- * 加1ml的BIOMYC-1溶液至100 ml培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养4天。期间需加入含BIOMYC-1溶液的少许的新培养基；
- * 4天后，加1ml BIOMYC-2溶液至100 ml的新培养基中，并维持培养3天；
- * 以上是一个处理循环阶段，必要时可继续2－3次如上处理循环；
- * 在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。
方案二
BIOMYC-3（03-038）的使用方法：
- * 加1ml BIOMYC-3至100 ml培养基中；
- * 持续培养14天，期间每2-3天更换一次培养基；
- * 14天后，用不含BIOMYC-3的完全培养基继续培养细胞14天后再做支原体检测。
经济考虑，用户选择一种方案即可；最佳方案是，客户先用方案一处理一周期，再用方案二处理一周期。
友情提示：如果使用其中一种方案，不能根除支原体，说明该支原体可能在另一种方案的抑菌谱内；36，37，38三者联合可有效根除实验室80%以上的支原体污染。
四、黑胶虫污染
在细胞复苏或传代时往往会出现黑胶虫污染，并且与细胞呈现此消彼长的现象，但是培养基却并不浑浊。黑胶虫具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。
黑胶虫较明显的污染特征：
- * 活跃游动
- * 呈卵圆状，球状，杆状等
目前科学界对黑胶虫的身份并无定论，Dr.Cell目前检测的黑胶虫样本，62%为细菌，38%为支原体。（→详情点击此处查看“黑胶虫通缉令”）
BIOMYC-1 货号：03-036-1B 主要成分：太妙菌素
BIOMYC-2 货号：03-037-1B 主要成分：Minocycline
BIOMYC-3 货号：03-038-1B 主要成分：环丙沙星
黑胶虫杀除方案一
BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）和三抗（03-033）的使用方法：
- * 加1ml BIOMYC-1和三抗溶液至100 ml培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养4天。期间需加入含BIOMYC-1和三抗溶液的少许的新培养基；
- * 4天后，加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至100 ml的新培养基中，并维持培养3天；
- * 以上是一个处理循环阶段，必要时可继续2－3次如上处理循环；
- * 在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。
黑胶虫杀除方案二
BIOMYC-3（03-038）和三抗（03-033）的使用方法：
- * 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100 ml培养基中；
- * 持续培养14天，期间每2-3天更换一次培养基；
- * 14天后，用不含BIOMYC-3和三抗溶液的完全培养基继续培养细胞14天后再做支原体检测。
好啦，今天我们就分享到这里啦~下期我们会接着分享后续细胞形态异常分析的其他方面噢~
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