Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是百萤生物生产的一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。WST-8在电子耦合载体1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色甲臜产物（formazan），颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

1.CCK-8试剂盒和MTT试剂盒有什么区别？

答：CCK-8试剂盒和MTT试剂盒都是用于测量细胞活力的方法，但CCK-8试剂盒有以下优势：

（1）CCK-8试剂盒使用的WST-8比MTT更易被细胞还原，因此灵敏度更高，检测时间更短；

（2）CCK-8试剂盒生成的甲臜产物是水溶性的，不需要添加有机溶剂或者洗涤细胞，操作更简单方便；

（3）CCK-8试剂盒对细胞毒性更小，不会影响细胞的正常生长和功能。

2.CCK-8的工作原理是什么？

答：CCK-8试剂盒中的WST-8可以被活细胞中的代谢产物还原为可溶性的形式。还原后的WST-8在存在电子耦合剂的条件下形成一种有色产物，其吸光度与细胞数量和代谢活性相关。通过测量吸光度的变化，可以间接评估细胞的增殖能力或毒性。

3. CCK的保存和稳定性如何？

答：CCK稳定性高，避光条件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。经常使用建议4℃保存，避免反复冻融。CCK正常颜色为粉红色，若颜色发生明显偏差，质量可能有发生变化。

4.CCK的细胞毒性如何？

答：CCK毒性非常低，因此CCK检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法，中性红染色法或DNA荧光染色法。

5.CCK会对活细胞进行染色吗？

答：不会，首先WST-8不会进入细胞染色，整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外WST和WST-8甲臜都属于高度水溶性组分，反应结束更换新的培养液，即可外源组分。

6.做细胞活性检测时，每孔应该接种多少个细胞？

答：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。

7.若是使用6孔或者24孔板进行试验，CCK试剂使用量怎么样呢？

答：如果要使用6孔板或24孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

8.能否用384孔板进行细胞增殖与活性检测的实验呢？

答：可以，CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍，然后加入培养基总体积的20%即可，这样可减少误差。

9.培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢？

答：不会的，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不会对检测造成影响。

10.在加入CCK-8时可否不更换培养基？

答：一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其它培养基。

11.只可以在450 nm波长处测OD值吗？

答：可以在450 nm波长处测OD值，但是若无此波长的滤光片，可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度高。

12.若是暂不检测OD值，该如何处理？

答：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化