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QuickFreezing细胞冻存液可替代传统细胞冻存

作者:苏州博特龙免疫技术有限公司 2022-02-10T17:11 (访问量:1112)

一、细胞冻存

细胞冻存是生物实验中经常使用的方式,也是细胞保存的主要方法之一。连续培养的细胞系容易发生遗传突变,已经建立好的特定细胞系对研究人员来说是非常宝贵的,还有对于来不及筛选的阳性杂交瘤细胞等等,细胞的冻存存储都是十分必要的。常规细胞冻存技术将细胞用冻存液重悬后,经过一定方式的梯度降温,最后置于液氮中超低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,在需要的时候再复苏细胞用于实验。

1、细胞冻存中的问题

细胞这一微小生命体的主要成份是液态的水,其结构精巧复杂,内部任何的物理损伤对于它都是十分严重的。低于零度的条件下水会结冰。悬浮在纯水中的细胞,随着温度的降低,细胞内外的水份都会结冰,所形成的冰晶会造成细胞膜和细胞器的破坏,从而引起细胞死亡,这种因细胞内部结冰而导致的细胞损伤称为细胞内冰晶的损伤。如果将细胞悬浮在溶液中,随着温度的降低,细胞外部的水分会首先结冰,从而使得未结冰的溶液中电解质浓度升高。若细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时间过长,细胞膜上脂质分子会受到损坏,细胞便发生渗漏,在复温时,大量水分会因此进入细胞内,造成细胞死亡。这种因保存溶液中溶质浓度升高而导致的细胞损伤称为溶质损伤。如果在溶液中加入冷冻保护剂,则可保护细胞免受溶质损伤和冰晶损伤。



细胞冻存和复苏一般采用“慢快融”的方法,该方法能较好地保证细胞存活率。细胞冻存的原则是慢冻,主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶,对细胞造成损害,慢冻一般是分别经过4度,-20度,-80度过夜,再转移到液氮的梯度降温;复苏细胞的原则是快融,在复苏时,一般以很快的速度升温,1-2分钟内即恢复到常温,细胞内外不会重新形成较大的冰晶,也不会暴露在高浓度的电解质溶液中过长的时间,从而无冰晶损伤和溶质损伤产生,冻存的细胞经复苏后仍保持其正常的结构和功能。目前细胞冻存多采用甘油二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

2、常规细胞冻存方式的缺点

常规细胞冻存液包含了细胞冻存所需的所有组分,主要成分是DMEM、胎牛血清及二甲基亚砜(DMSO)等,DMSO是常用的细胞冷冻保护剂,其分子量小、溶解度大、细胞膜通透性好,能够快速穿透细胞膜进入细胞,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞膜通透性,提高细胞内离子浓度,减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤达到保护细胞的目的。

目前使用最多的是传统手动梯度降温、程序性降温盒降温等,存在着诸多的问题:

(1)传统4℃、-20℃、-80℃过夜、转液氮罐的手动梯度降温方式,操作步骤多,耗时耗力。

(2)程序性降温盒价格高,占用-80℃冰箱空间,且一般含有异丙醇,难清理。

(3)细胞最后需要转移到液氮罐中保存,液氮罐一般有专人管理,放样取样多有不便。

(4)传统冻存液含有血清成分,存在微生物污染风险,且批次不稳定。

二、QuickFreezing 细胞冻存液

Biodragon研发的具有自主知识产权的特色产品:QuickFreezing细胞冻存液,具有诸多优势:

(1)无需繁琐耗时的程序性降温,可以直接放于-80℃冰箱,可长期保存

(2)无血清,无蛋白,化学组成明确,批次稳定

(3)不会引入造成细胞污染的外源因子

(4)使用常规含血清冻存液容易聚团的细胞,如293细胞等,非常适合用本产品

为了方便客户更好的使用,北京博奥龙公司还对产品的包装规则进行了特别的设计:

(1)包装设计为10ml×5,无需再次分装,在使用过程中不易造成不同使用者或不同细胞间的交叉污染。

(2)特别为使用96孔板等冻存细胞的客户,提供QuickFreezing-2×M细胞冻存液规格,其为普通细胞冻存液两倍浓度,客户可直接从96孔板中置换一半体积的冻存液进去,即可直接放入-80℃冰箱冻存,简便快捷。

说明:若-80℃冰箱开闭频繁,会导致冰箱局部温差,影响细胞冻存效果,保存时间超过半年以上或珍贵细胞种子样品,建议由-80℃冰箱转移到液氮存储!

货号名称特点规格
KX0310041QuickFreezing-M常规哺乳动物专用5×10ml
KX0310041-3030ml
KX0310041-100100ml
KX0310042QuickFreezing-2×M整板冻存专用5×10ml
KX0310042-3030ml
KX0310042-100100ml
KX0310043QuickFreezing-I昆虫细胞专用5×10ml
KX0310043-100100ml

三、公司简介

Biodragon是一家由留学归国人员创办的生命科学领域高新技术企业,专业从事新型生化试剂的研发和销售。公司理念是通过自主创新的品牌产品改变传统实验模式,使生命科学研究变得更轻松、更高效。公司成立八年多来推出了上万种自主品牌产品,其中包括QuickAntibody™免疫佐剂、QuickShuttle™转染试剂、QuickFreezing™细胞冻存液、QuickVerification™胶体金检测卡、Hybridoma Feeder添加因子和Pan-HPV™ HPV L1抗体等多种独特的自主知识产权产品。秉承“专业、创新”的理念,公司将继续在擅长专业领域做强做大,为客户提供更多的创新产品和服务,力争成为国际知名的品牌生化试剂公司。

公司主要产品有抗体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗体、近300种病理级抗体、近3000余种病毒蛋白及病毒抗体,另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。

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