法。 该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。试剂盒中使用的
iFluor TM和 mFluor TM染料的琥珀酰亚胺酯（SE）显示出与蛋白质的脂族
胺的良好反应性和选择性，并形成羧酰胺键，其与天然肽键相同且稳定。
iFluor TM 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色，荧光原位杂交，流式
细胞术和其他生物学应用。 每个 ReadiLink™Rapid 抗体标记试剂盒都提供了
进行两次偶联反应（2x50μg 蛋白质）的所有必需成分。 每个试剂盒可用于
标记 50-100μg 单克隆，多克隆抗体或其他蛋白质（> 10 kDa），只需两个
简单的混合步骤
Readilink™快速试剂盒标记原理
1.通过在反应缓冲液（pH 7.5-8.5）中将标记染料与蛋白质（待标记的）混合，
开始标记反应。
2.孵育得到所需蛋白质缀合物和非反应性游离染料的混合物。
3.通过将非荧光 Tide Quencher
TM（TQ）染料与反应溶液混合来淬灭反应。 TQ 染料阻止反应并将非反应性自由
标记染料转化为非荧光 TQ 标记染料复合物，这消除了游离标记染料的背景荧光干扰。
试剂盒组成
Components Amount Storage
Component A：Mitolite™Red 2 vial (one vial is for 50 ug protein) —20℃
Component B：Live Cell Staining Buffer 1 vial (20uL) —20℃
Component C：TQ™-Dyed Quench Buffer 1 vial (20uL) —20℃
标准操作规程（标记 50μg 蛋白质）
将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前立即准备所需的溶
液。 以下 SOP 是标记抗 HDAC IgG 抗体的实例。
1.准备蛋白质溶液（溶液 A）：
为了标记 50μg 蛋白质（假设目标蛋白质浓度为 1 mg / mL），将 5μL（总反应体
积的 10％）反应缓冲液（组分 B）与 50μL 目标蛋白质溶液混合。
注 1.如果蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg 蛋白质可用于标记
反应。
注 2：为了标记 100μg 蛋白质（假设目标蛋白质浓度为 1 mg / mL），将 10μL
（总反应体积的 10％）反应缓冲液（组分 B）与 100μL 目标蛋白质溶液混合。
注 3：蛋白质应溶解于 pH7.2-7.4 的 1X 磷酸盐缓冲盐水（PBS）中;如果蛋白质溶解
在甘氨酸缓冲液中，必须用 1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用 Amicon Ultra- 0.5，
Ultracel-10 膜，10 kDa（来自 Millipore 的 cat＃UFC501008）去除游离胺或铵
盐（如硫酸铵和乙酸铵）。
注 4：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。
注 5：如果蛋白质浓度低于 1 mg / mL，结合效率会显著降低。为获得最佳标记效
率，建议最终蛋白质浓度范围为 1-2 mg / mL。
2.运行结合反应：
2.1 将蛋白质溶液（溶液 A）加入一小瓶标记染料（组分 A）中，通过反复移液几
次将其充分混合，或将小瓶涡旋几秒钟。
注意：使用标记染料的两个小瓶（组分 A）通过将 100μg 蛋白质分成 2x50μg 蛋
白质并使每个 50μg 蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记 100μg 蛋白质。 将两个
小瓶合并用于下一步。
2.2 将缀合反应混合物在室温下保持 30-60 分钟。
注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。
3.停止共轭反应：
3.1 加入 5uL（50μg 蛋白质）或 10μL（100μg 蛋白质），这是 TQ 染色猝灭缓冲
液（组分 C）总反应体积的 10％到共轭反应混合物中（来自步骤 2.2），混合。
3.2 在室温下孵育 10 分钟。
3.3 使用标记的蛋白质（抗体）。 蛋白质共轭物的储存
蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如 0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL 储
存。 为了更长时间的储存，可以将蛋白质缀合物冻干或分成单次使用的等分试样
并在≤-20℃下储存。
名称 货号 规格 价格
ReadiLink™ FITC 抗体标记试剂盒 1299 2 Labelings 1740
ReadiLink™RPE 抗体标记试剂盒 1310 2 Labelings 5940
ReadiLink™APC 抗体标记试剂盒 1311 2 Labelings 5940
ReadiLink™PerCP 抗体标记试剂盒 1312 2 Labelings 3540
ReadiLink™ Cy7 抗体标记试剂盒 1294 2 Labelings 1740
ReadiLink™ mFluor™620 抗体标记试剂盒 1123 2 Labelings 1740
ReadiLink™ iFluor™488 抗体标记试剂盒 1255 2 Labelings 1740